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快速无菌检查方法的相关法规和方法验证要求

发布时间：2023-09-20 15:58 信息来源： 阅读次数： 次

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。2020版中国药典—《1101无菌检查法》指出，无菌检查包括薄膜过滤法和直接接种法，只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。生物制品生产工艺、组成成分复杂，一般不能够进行终端灭菌，因此，对生物制品进行严格的质量控制，是降低制品中外源因子或有毒杂质污染风险，保证生物制品安全有效的必要措施。

无菌检查法实际包含3个部分的实验，分别为：培养基适用性检查、方法适用性试验和供试品的无菌检查。

培养基适用性检查主要目的有两个，一是确认使用的培养基本身是无菌的，二是确认使用的培养基细菌或真菌是可以生长并且在规定时间内可以被观察到，即灵敏性检查。方法适用性试验主要目的是判断采用的方法，薄膜过滤法或者直接接种法，是否适用于要检测的这种产品，方法适用性试验可以与供试品的无菌检查同时进行。药典中从检测数量、检验量、阴/阳性对照、接种要求、培养观察和结果判读全都进行了细致规定。关于无菌检查法，美国、日本、欧洲药典等基本实现药典协调，这里重点对比中美法规对于供试品的无菌检测要求差异。

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随着新型生物制品的涌出，细胞制品的普及，无菌检查提出了新要求。传统培养方法因为至少需要14天的培养时间才可以出结果，因此在时效性上无法满足这些生物制品的放行检需求，也包括原物料的质检需求。

01

关于无菌检测替代方法的法规要求

laws and regulations

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2020年版《中国药典》第四部通则9201，药品微生物检验替代方法验证指导原则提出，随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：

① 基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；

② 直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞计数法、流式细胞计数法等；

③ 基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。

《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》中提到，在可行的情况下，首选药典方法用于无菌检测，但考虑到Car-T细胞产品的特殊性，也鼓励研究者开发快速的无菌检测法，但应与药典方法平行进行，在获得充分的比对数据后，结合无菌生产全过程的风险评估设计放行策略，才有可能替代药典方法。

USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products a risk-based aproach介绍了有效期较短的无菌产品放行的快速微生物测试方法， 包括ATP生物发光法、核酸扩增法、流式等，并详细阐述了这些替代方法的特点。

EP 2.6.21 Nucleic acid amplification techniques介绍了核酸扩增法可作为替代方法，并详细阐述了该方法作为替代法需验证的性能。

核酸qPCR方法适用范围广，具有灵敏度高、特异性强、检测时间短等特点，被广泛应用于基因工程药物的相关检验中。必威Betway东盟体育通过对样本处理方法和相关的qPCR检测方法进行充分验证，独立开发了基于荧光探针qPCR方法的细菌/真菌快速检测方法，经验证，该试剂盒与药典方法具有可比性。

02

必威Betway东盟体育—细菌/真菌快速检测试剂盒

CANVEST qPCR Detection Kit

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  • CANVEST® 细菌 qPCR 检测试剂盒采用荧光探针 qPCR 技术，用于定性检测细胞、细胞及基因治疗产品以及其他生物制品中是否有细菌的污染。
本试剂盒中的引物探针可以对多种细菌（覆盖200种以上常见病原菌）进行特异性检测，与真菌、支原体、昆虫、人类及动物细胞（猪源细胞除外）不存在交叉反应。本试剂盒参照中国药典 qPCR 方法检测相关要求进行验证，检测限为100 CFU/mL。试剂盒中加入了内部控制系统，内部控制对照（IC）可在 PCR 扩增反应阶段加入，以判断待检样本对扩增反应是否存在抑制；也可在样本提取阶段加入，作为实验整体对照，同时监测提取得率以及样本中可能存在的 PCR 抑制情况。操作步骤简单，可批量操作。


  • CANVEST® 真菌 qPCR 检测试剂盒主要适用于效期短、批量小，无法保证在产品使用前完成放行检查的细胞类制品，也可用于检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批是否有常见病原性真菌的污染。

本试剂盒中的引物探针可以对多种致病性真菌进行特异性检测，与原核基因组、人等哺乳类动物基因组不存在交叉反应，其核酸检测限为 1-5genome copies/reaction，同时参照《中国药典》(ChP 9201)、《欧洲药典》（EP 5.1.6）和《美国药典》(UPS 1223) ，从专属性、检测性、等效性、重现性和耐用性等 5 个方面进行了全面的验证。操作简单快捷，样本丢失率低，还可降低试剂和操作过程中存在的污染风险


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快速微生物检测的相关法规

laws and regulations

  • 美国药典-USP<1071>RAPID MICROBIAL TESTS FOR RELEASE OF STERILE SHORT-LIFE PRODUCTS A RISK-BASED APPROACH(无菌短货架期产品放行的快速微生物检查法: 依据风险评估的方法)

  • 美国药典-USP<1223>VALIDATION OF ALTERNATIVE MICROBIOLOGICAL METHODS(微生物替代方法验证）

  • PDA TR33（中英文）-2013 可选择的和快速的微生物检测方法的评价验证与执行

  • 美国药典-USP [71] STERILITY TESTS无菌检查

  • 中国药典—1101无菌检查法

  • 中国药典—9201药品微生物检验替代方法验证指导原则

  • 欧洲药典EP.2.6.27 Microbiological Examination of Cell-based preparations (9.2)

  • CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点

  • 细胞类制品微生物检查法草案拟公示稿

    部分图文来源于网络，侵联删

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